0 引言

外泌体是由机体大多数细胞分泌的。1983 年，Johnstone[1]等首次在网织红细胞中发现外泌体的。研究人员在观察转铁蛋白受体的活动时，发现在网织红细胞成熟期间，转铁蛋白受体被打包，并且被网织红细胞分泌到胞外小泡中。便认为它是网织红细胞中的物质被溶酶体破坏后分泌到胞外的垃圾。尽管外泌体发现的较早，但是由于人们对外泌体的认识还不足，所以在过去的几十年里，它不受研究人员的关注。据最早报道，部分研究人员认为外泌体主要由免疫细胞（树突状细胞、T 细胞、B 细胞巨噬细胞）与肿瘤细胞分泌的。但是人们对外泌体的了解也更深入，更全面，认识到外泌体是包括肿瘤细胞在内的大多数细胞分泌的囊泡小体，血液，尿液等体液均能检测到外泌体[2]。并发现其具有一定的生物学活性，它能够在血管之间自由移动，参加细胞与细胞之间沟通，参与凝血，血管生成等活动。因此，近几年，研究人员掀起了研究外泌体的热潮。

1 外泌体的组成

由胞内分泌到胞外的小囊泡，称为胞外囊泡。囊泡有三大类，根据直径的大小及形态学差异，囊泡分三种，直径由小到大顺序依次为：外泌体（40-100 nm)，微泡(100-1000 nm)，凋亡小体(1000-5000 nm)[2]。外泌体直径与病毒直径范围接近，约40-100 nm，密度在/mL，使用蔗糖密度梯度离心法提取外泌体时，外泌体可以在密度为 g/mL 的蔗糖中沉降。电镜下，外泌体主要为杯形，杯形形状可能是由于样品制备中外泌体脱水裂解而形成的。但是在体液中，球形结构为其在体液中的主要形态。外泌体具有脂质双分子层结构，其主要由蛋白质，脂质，核酸组成，但是外泌体内部缺乏高尔基体，内质网等活细胞内部存在的细胞器[3]。

1.1 外泌体所含蛋白质

外泌体来源很广，种类繁多，外泌体的母代细胞可以决定外泌体蛋白的成分及含量。

外泌体中蛋白质分子，一部分为常见蛋白，出现在所有外泌体中。如细胞骨架蛋白（微管蛋白，肌动蛋白），四跨膜蛋白（CD9，CD63），脂质相关蛋白，热休克蛋白家族（HSP90）等。另一部分蛋白和细胞来源相关，如与内膜系统转运相关的蛋白ALIX，Tsg101 及ESCRT 家族蛋白等，但外泌体不含有内质网蛋白如钙联蛋白Calnexin。因此我们可以使用CD63,CD9 以及钙联蛋白衡量外泌体提取方法是否可行，以及判断使用此方法提取的外泌体纯度是否可靠，如提取外泌体后进行蛋白免疫印迹法，若在CD63 或者CD9 等外泌体通用蛋白的相应位置上出现条带，则证实提取到外泌体，若存在内质网蛋白如钙联蛋白，则在其分子量相应的位置上出现条带，则证实提取的外泌体不纯，若无条带，则证实此种提取方法获取的外泌体纯度高。

此外外泌体细胞来源的蛋白具有相对特异性：如B 淋巴细胞分泌的外泌体表面有MHC-II 类分子；肿瘤细胞来源的外泌体携带大量肿瘤抗原[4]。此外，外泌体部分蛋白也可以用于疾病的早期诊断，如胎球蛋白A 可作为急性肾损伤的标志物[5]。再如乳腺癌的外泌体促凋亡蛋白生存素2B（Survivin2B），于乳腺癌早期患者中，表达较多，晚期弱表达甚至不表达，与肿瘤分级呈负相关[6]。因此，外泌体生存素2B 可作为乳腺癌早期诊断的肿瘤标志物。

1.2 外泌体所含脂质

外泌体富含脂质，外泌体膜与细胞膜较接近，富含鞘磷脂，胆固醇，磷脂酰丝氨酸，磷脂酰肌醇等成分，同时也含有细胞来源的脂质。这些脂质成分，既能维持外泌体脂质双分子层的结构，促进膜的流动，保护外泌体的内容物miRNA，mRNA，蛋白质等成分的完整，膜上的脂质分子又能作为信号分子，介导细胞间通讯。

1.3 外泌体所含核酸

除蛋白，脂质外，外泌体含有大量的微小RNA（MicroRNA，miRNA） 和 信 使RNA（message RNA，mRNA），核糖体RNA（rRNA），线粒体DNA（mtDNA）等。一直以来，我们多是依靠肿瘤的大小、恶性程度、淋巴结是否转移、肿瘤分期与分级，来判断疾病及其预后。如今，外泌体携带的核酸可以作为疾病早期诊断的标志物，如食管癌细胞分泌的外泌体miR-21 可以辅助食管癌的诊断[7]，外泌体miR-145 可作为糖尿病肾病的早期诊断，再如胃癌来源的外泌体携带的长链非编码RNA(LncRNA)在进行肿瘤诊断上，比CEA，CA199 更有诊断价值。此外，外泌体携带的核酸，可以调节靶细胞基因的调控。如乳腺癌来源的外泌体通过分泌miR-10，下调内皮细胞紧密蛋白的表达，增加血管内皮的通透性，促进乳腺癌的血源性转移[8]。

文章来源：《化工设计通讯》 网址: http://www.hgsjtxzz.cn/qikandaodu/2021/0718/829.html